肉鸡谷胱甘肽 S －转移酶 A3基因的克隆及蛋白的表达和纯化

摘要：

[目的]谷胱甘肽S－转移酶A3(GSTA3)是GSTs超家族中α家族的一员,具有解毒功能,同时还参与抗氧化应激引起的信号通路调节,另外在类固醇和前列腺素的合成中也必不可少. [方法]本试验采用RT‐PCR方法扩增肉鸡GST A3基因,连接pZeroBack／blunk克隆质粒,再与表达载体 pET‐28a连接,并转入 E .coli BL21 (DE3 )中获得pET‐28a‐GSTA3重组表达质粒,使用 IPTG 诱导其蛋白的表达,应用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并对其进行 SDS‐PAGE鉴定,使用谷胱甘肽‐S转移酶活性测定试剂盒对重组蛋白进行活性检测. [结果]试验成功构建重组表达质粒pET‐28a‐GST A3 ,并在大肠杆菌中成功表达,其大小为29.6 kDa ,与预期一致,并且表达的重组GST A3蛋白具有生物活性. [结论]本试验成功获得高纯度的可溶性GSTA3融合蛋白,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础.

关键词：胫骨软骨发育不良、谷胱甘肽S-转移酶A3、基因克隆、原核表达

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资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500800;晋中市重点科技创新平台P171002‐3;山西省回国留学人员科研资助项目2017‐073;山西省科技攻关项目20130311027‐3 ,201703D221024‐5;国家自然基金31072179

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3886-3892