应用均匀设计优化文冠果ISSR-PCR反应体系

摘要：

采用均匀设计,对引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度4个因素分别设置5个水平,对文冠果ISSR-PCR反应体系进行优化,在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测,构建了文冠果ISSR-PCR优化反应体系,在20 μL ISSR-PCR反应体系中,各因素的最佳浓度分别为:2×PCR buffer、0.2mmol·L-1dNTP、0.3μmol·L-1引物、2.5 mmol·L-1 Mg2+和0.4 U TaqDNA聚合酶,进一步对扩增程序中的循环次数和退火温度,以及ISSR引物进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性5 min,接着进行40个循环:94℃变性35s,52～56℃退火35 s,72℃延伸45 s;循环结束后,72℃延伸10 min.

关键词：文冠果、ISSR-PCR、均匀设计

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分类号：Q943.2(植物学)

资助基金：山西省攻关项目20120311015-3;山西省林业厅科技支撑项目2008001;山西省农业推广示范项目SNJTGSFXD201315

在线出版日期：2014-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：241-244,248