小鼠核因子κB受体活化因子配基活性区的克隆、表达及生物活性分析
核因子κB受体活化因子配基是诱导破骨细胞分化、成熟的关键因子,在生物医学研究中应用广泛.本实验以小鼠的骨髓细胞cDNA为模板,采用PCR技术获得小鼠核因子κB受体活化因子配基活性区基因,并将该基因克隆至His标签的融合蛋白表达载体pET28a(+),经鉴定正确的质粒转化至BL21表达菌株中.通过调节诱导目的蛋白表达的培养温度、TPTG浓度及诱导时间,筛选出重组融合蛋白表达的最佳条件.将纯化后的重组蛋白稀释成不同浓度,刺激小鼠破骨前体细胞Raw264.7细胞分化,经抗酒石酸酸性磷酸酶染色后可见破骨细胞的形成,表明该重组蛋白具有较好的生物活性,可替代商品化的鼠源核因子κB受体活化因子配基.
小鼠核因子κB受体活化因子配基、基因克隆、原核表达、破骨细胞分化
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Q78(基因工程(遗传工程))
上海市科委研发公共服务平台"细胞信号转导网络研究技术";国家自然科学基金
2010-11-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
790-798