甘丙肽2型受体在HEK293细胞中的表达及内化过程

摘要：

构建了在甘丙肽2型受体(GalR2)N端带myc表位标签的真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞.进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程.Western blot结果发现转染组myc-GalR2蛋白水平呈高表达.myc-GalR2主要分布在细胞膜上,少量分布于胞浆中.当给予甘丙肽(10-7 mol/L)刺激后,5min时可见细胞膜上myc-GalR2明显减少,胞浆内myc-GauR2增多,15 min时膜上myc-GalR2几乎全部消失.表明GalR2受体与配体结合后发生内化,且受体蛋白内化为时间依赖性的转运过程,证实在HEK293细胞GalR2会出现配体依赖性内化.同时,以已知膜蛋白5-HT1AR的内化作为对照,可见在给予甘丙肽刺激以后,5-HT1AR没有发生内化,受体蛋白仍然表达在膜上.此外,通过测定胞内钙水平激活情况来检测其信号通路激活情况,表明myc对GalR2功能没有明显影响.

关键词：表位标签、甘丙肽2型受体(GalR2)、G蛋白耦联受体(GPCRs)、HEK293细胞、膜转运

所属期刊栏目：26

分类号：Q753(分子遗传学)

在线出版日期：2010-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：373-379