青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备

摘要：

制备青杄(Picea wilsonii)PwHAP5基因的特异性多克隆抗体,为研究PwHAP5基因功能、分子机制奠定基础.经PCR扩增获得青杄花粉PwHAP5基因片段与载体pET-48b相连构建原核表达载体pET-48b-PwHAP5.经诱导产生重组蛋白PwHAP5,通过His-NTA镍柱纯化蛋白产物.蛋白经SDS-PAGE检测后再免疫兔子制备兔抗血清.血清经ProteinA纯化后,通过SDS-PAGE和Western blot检测抗体纯度和特异性.结果表明,成功构建了原核表达载体pET-48b-PwHAP5,制备了分子质量约为45 kD的重组蛋白PwHAP5.获得的青杄PwHAP5兔抗血清经间接ELISA法检测效价达1:729000以上;制备的PwHAP5蛋白兔多克隆抗体能特异性识别抗原,效价高,满足后续研究PwHAP5蛋白在青杄生长发育中的功能等需求.

关键词：PwHAP5基因、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65;Q785;R392

资助基金：北京林业大学中央高校基本科研业务费专项资金项目2021ZY01

在线出版日期：2022-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：142-149