10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0941
基于密码子优化的FAD依赖葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质
旨在获得表达量高的FAD依赖的葡萄糖脱氢酶.通过FAD依赖的葡萄糖脱氢酶密码子优化,人工合成基因片段,构建重组表达载体pMD-GDH,转化毕赤酵母X33菌株后利用甲醇诱导培养实现分泌表达.结果显示,经试管水平筛选阳性转化子获得一株酶活高且稳定的重组菌株,在10 L发酵罐培养时经过136 h诱导培养,酶活达到257600 U/L.酶学性质分析表明,以葡萄糖为底物时最适温度和pH分别为55℃和7.0,在50℃下处理150 min仍有70% 的活性,在pH 4-7范围内,37℃保温4 h,FAD-GDH仍能保持50% 以上的活性.金属离子Cu2+对酶活抑制作用比较大.FAD-GDH的底物专一性较好,以葡萄糖为最适底物.经毕赤酵母密码子偏好性优化实现了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的高效表达,为应用于血糖检测提供理论依据.
FAD依赖的葡萄糖脱氢酶、密码子优化、重组毕赤酵母、酶学性质
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河北省科学院科技计划项目17202
2019-08-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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