黄孢原毛平革菌漆酶基因lac1680的克隆、表达及产酶研究

摘要：

以先前筛选到的高产漆酶黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)为模板,利用同源克隆技术合成一个全长为1680 bp的漆酶基因,核苷酸及氨基酸序列比对显示该基因与真菌漆酶基因有较高的同源性,将其命名为lac1680,将该基因连接到构建好的pET24a载体上,并转入表达菌株BL21 Escherichia coli(DE3)中,经对重组菌预表达的全菌裂解物进行SDS-PAGE检测,获得75 kD目的条带,表明诱导表达成功.随后利用NI-NTA层析柱对洗脱下来的lac1680蛋白进行纯化,纯化回收后,漆酶纯度可达98％ 以上.通过对比基因工程菌和黄孢原毛平革菌野生菌株不同培养时间产酶活力,结果表明构建好的工程菌活力比原菌酶活力有明显的提高,提高了近39％.

关键词：黄孢原毛平革菌、漆酶基因、异源表达、蛋白纯化、酶活力

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资助基金：国家自然科学基金项目5201049120029;河南省重点科技攻关计划项目122102210168,152102210081

在线出版日期：2018-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：214-220