蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10于大肠杆菌不同载体的可溶性表达策略研究

摘要：

蒙古黄芪病程相关蛋白(Astragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10,AmPR-10)具有核酸酶活性,对黄芪生长发育及抗病机制具有重要意义.但从天然黄芪中提取蛋白质的传统方法成本较高,蛋白得率较少.研究首次利用大肠杆菌表达体系对AmPR-10进行可溶性外源表达,构建了3种重组子:①以pET28a为载体构建pET28a-AmPR-10;②以pET30a为载体构建pET30a-AmPR-10;③以pET30a为载体、大肠杆菌分子伴侣skp修饰构建pET30a-skp-AmPR-10.通过SDS-PAGE分析,目的蛋白可溶性表达量比较结果是:pET30a-skp-AmPR-10>pET30a-AmPR-10>pET28a-AmPR-10.由蛋白质三级结构模拟分析发现,载体pET-30a上的标签S-tag通过影响AmPR-10局部α螺旋构象而提高目标蛋白的可溶性表达,分子伴侣skp通过提高融合蛋白整体α螺旋比例进一步提升目标蛋白可溶性表达量.研究解决了目前从天然黄芪中提取蛋白操作复杂、提取量小的问题.同时,经测定,目的蛋白具有核酸酶活性,为外源AmPR-10相关活性研究提供了依据.

关键词：蒙古黄芪、病程相关蛋白、可溶性表达、标签、分子伴侣

所属期刊栏目：11

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：山西省高等学校科技创新项目;山西省自然科学基金面上自然基金项目;山西省科技厅应用基础研究项目

在线出版日期：2021-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：231-237