普通牛及其近缘种特异性序列筛选及环介导等温扩增检测方法

摘要：

近年来,肉制品掺假事件频频发生,亟需建立快速、可靠的肉制品动物源性成分检测方法,保障肉类食品安全.与常规PCR等检测方法相比,环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法具有高特异性、高灵敏度、反应快、易操作等优势.基于此,利用生物信息算法筛选普通牛及其近缘种(牦牛、水牛、美洲野牛)的全基因组序列,以获得种间相似性序列,进而建立并优化可用于检测普通牛及其近缘种成分的特异性LAMP方法.最终优化后的LAMP反应体系为:10μmol·L-1外引物F3和B3各0.25μL,10μmol·L-1内引物FIP和BIP各2μL,2 mmol·L-1 dNTP 2.5μL,25 mmol·L-1 MgSO44μL,5 mol·L-1甜菜碱3.5μL,8.0 U·μL-1 Bst DNA聚合酶1μL,10×ThermoPol Buffer 2.5μL,DNA模板2μL,加双蒸水至25μL;LAMP反应条件为:65℃恒温扩增1 h,80℃10 min.在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ荧光染料后,检测结果可用肉眼直接观察.优化后的LAMP方法在1 h内能特异性地检测出普通牛、牦牛、水牛及美洲野牛成分,检测灵敏度达到0.020 ng·μL-1,且可特异性地检测出市售肉制品中含有牛肉成分的样品.研究所建立的LAMP方法具有高特异性、高灵敏度、反应快速、操作简便和无需精密仪器等特点,可应用于肉制品中普通牛及其近缘种成分的实际检测,为我国肉类食品安全提供了有力保障.

关键词：环介导等温扩增、牛近缘种、检测方法

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资助基金：国家转基因生物新品种培育重大专项2016ZX08012005

在线出版日期：2020-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：704-710