Tmem119基因敲入荧光示踪工具小鼠的构建及表型验证

摘要：

[目的]通过将tdTomato基因片段插入到Tmem119基因终止密码子位置建立了 Tmem119=tdTomato工具小鼠模型,并对该小鼠进行表型验证.[方法]制备Tmem119 sgRNA、Cas9 mRNA和donor vector,利用CRISPR/Cas9技术通过显微注射共同注射到C57BL/6小鼠受精卵中,通过交配及基因型鉴定获得F1代阳性小鼠;通过荧光检测验证小鼠Tmem119蛋白在大脑各区域的表达情况.[结果]基因型检测结果表明,tdTomato表达片段成功插入到Tmem119基因终止密码子前;免疫荧光检测结果表明,tdTomato蛋白荧光在小胶质细胞内与经典标记蛋白Iba1荧光重叠,与星形胶质细胞标记蛋白GFAP不重叠.[结论]成功构建特异性标记小胶质细胞的红色荧光示踪工具小鼠,为小胶质细胞的动态深入研究提供模式工具.

关键词：Tmem119、小胶质细胞、CRISPR/Cas9、基因编辑、小鼠模型

所属期刊栏目：33

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：上海市科技创新行动计划实验动物专项课题2214900101

在线出版日期：2023-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：143-149,168