溴化乙锭诱导无线粒体DNA宫颈癌HeLa细胞系的构建和鉴定

摘要：

[目的]构建和鉴定由溴化乙锭(EB)诱导的无线粒体DNA(mtDNA)官颈癌ρ°HeLa细胞系,探讨mtDNA与官颈癌发生的关系.[方法]采用含50 ng/ml溴化乙锭、100 μg/ml丙酮酸钠和50 μg/ml尿嘧啶核苷的高糖DMEM完全培养基中传代培养HeLa细胞.低剂量EB连续诱导60d后,采用营养缺陷鉴定、PCR和Western Blot鉴定无mtDNA的ρ° HeLa细胞系;采用透射电子显微镜观察ρ° HeLa细胞内线粒体形态变化;采用CCK8法测定ρ° HeLa细胞增殖曲线.[结果]经溴化乙锭诱导60 d,可以培养出具有尿嘧啶核苷依赖性的无mtDNA宫颈癌HeLa细胞系.普通PCR和qPCR结果均显示,低剂量EB诱导60d的ρ°HeLa细胞中mtDNA完全缺失.Western Blot结果显示,HeLa细胞中能表达核编码的NDUFA9蛋白,也能表达线粒体编码MT-ND1蛋白.而ρ° HeLa细胞中已无MT-ND1蛋白表达,但核编码的NDUFA9蛋白能够正常表达.透射电子显微镜观察显示,ρ° HeLa细胞内部分出现空泡改变,线粒体嵴被破坏.CCK8细胞增殖实验结果显示,ρ° HeLa细胞系生长速度显著低于正常HeLa细胞系,且差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]无mtDNA的宫颈癌HeLa细胞系的建立,为后续研究mtDNA突变和线粒体功能在官颈癌发生发展中的作用及机制奠定了基础.

关键词：溴化乙锭、线粒体DNA、缺失、HeLa细胞系

所属期刊栏目：29

分类号：Q2-33

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;云南省中青年学术;技术带头人后备人才项目;大理大学大学生创新创业训练计划;云南省教育厅科研项目;大理大学大学生科研基金项目

在线出版日期：2019-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：77-83