拟南芥肌醇半乳糖苷合成酶与棉子糖合成酶的体外催化活性比较

摘要：

[目的]基因克隆及原核表达纯化后比较拟南芥的2个肌醇半乳糖苷合成酶及2个棉子糖合成酶的体外催化活性,为微生物法或酶法合成棉子糖尊定基础.[方法] RT-PCR克隆拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)的基因,分别构建原核表达菌株,诱导表达纯化获得酶,电泳检测及蛋白定量后进行体外酶催化反应,HPLC分析产物.[结果]克隆到GolS1与GolS3及RafS1与RafS5的基因,原核表纯化获得纯酶,以反应体系中目标产物生成速率衡量,GolS1与GolS3催化速率分别为0.51和0.28 mmol/(mg· min),RafS1与RafS5的催化速率分别为0.45和0.21 mmol/(mg·min).[结论]拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)基因经异源表达后具有良好酶活,其中GolS1酶活是GolS3的1.82倍,RafS1酶活是RafS5的2.14倍.

关键词：棉子糖、肌醇半乳糖苷合成酶、棉子糖合成酶、拟南芥、基因克隆、体外催化活性

所属期刊栏目：29

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：广东省岭南特色果蔬加工关键技术;工程技术研究中心项目;食品科学创新团队项目;广东石油化工学院人才引进项目;广东石油化工学院食品科学学科开放基金项目;广东省自然科学基金

在线出版日期：2019-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：69-76