优化噬热栖热菌的遗传转化体系

摘要：

[目的]优化噬热栖热菌Thermus thermophilus的转化体系.[方法]将质粒DNA的形态、浓度及转化时间作为变量设计噬热栖热菌T.thermophilus的转化体系,以通过直接双交换同源重组法获取△pyrE突变体的概率为依据判定转化效率.[结果]在转化时间为2h,使用3.0 μg/mL线性质粒DNA,获取表观△pyrE的概率为3.44×10-5;而使用同样浓度的超螺旋质粒DNA,该概率可达1.03 ×10-3;说明超螺旋质粒的转化效率高于线状质粒.质粒DNA的使用浓度及转化反应时间对转化效率亦有影响,但并非完全成正相关.使用浓度为15 μg/mL超螺旋质粒DNA,在转化时间为3h时,获取表观△pyrE的概率达到最大值(1.36×10-2);超过该阈值,转化效率降低.[结论]在T.thermophilus中,通过优化转化体系将基因无痕敲除突变体获取概率提高到10-2.

关键词：噬热栖热菌、遗传转化系统、双交换性同源重组法、基因无痕敲除突变体

所属期刊栏目：29

分类号：Q93-31(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金;陕西省自然科学基金;陕西省高校科协青年人才托举计划项目

在线出版日期：2019-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：63-68