尼罗罗非鱼ZAP-70蛋白的原核表达、纯化及其多抗制备

摘要：

[目的]构建尼罗罗非鱼ZAP-70原核表达载体,纯化其重组蛋白并制备多克隆抗体.[方法]采用无缝克隆技术构建尼罗罗非鱼ZAP-70重组表达载体,并转人大肠杆菌B21中诱导表达,将表达的ZAP-70蛋白免疫日本大耳兔得到多克隆抗体,采用Western Blotting和ELISA技术鉴定抗体的特异性和效价.[结果]成功构建原核表达重组质粒pET-B2m-ZAP-70,诱导表达的重组蛋白分子量约为39 kDa,主要以包涵体的形式表达;获得效价为1∶512 000的多克隆抗血清,WB检测显示该抗体能够特异性的识别所表达的ZAP-70重组蛋白.[结论]尼罗罗非鱼ZAP-70重组质粒在大肠杆菌B21中高效表达,分子量约为39 kDa,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步探索ZAP-70在尼罗罗非鱼免疫系统中的功能奠定了基础.

关键词：罗非鱼、ZAP-70、原核表达、多克隆抗体、免疫印迹

所属期刊栏目：29

分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广西自然科学基金;广西重点研发计划项目

在线出版日期：2019-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：16-22