东方肉座菌EU7-22纤维素内切酶Ⅰ的异源表达

摘要：

[目的]实现东方肉座菌纤维素内切酶EGⅠ在毕赤酵母中的表达,获得重组EGⅠ.[方法]通过RT-PCR获得EGⅠ开放阅读框.将EGⅠ成熟肽和PHO1信号肽的DNA片段插入pPIC3.5K后,重组表达载体电转化毕赤酵母.通过甲醇诱导表达和镍柱纯化获得EGⅠ.以羟甲基纤维素钠检测活性,以肽N-糖苷酶F分析N-糖基化,以SDS-PAGE分析表达情况和糖基化修饰.[结果]获得EGⅠ分泌表达菌株,诱导96 h后上清液活性为0.513±0.002 U/mL,纯化后的EGⅠ活性为0.558 ±0.012 U/mg.SDS-PAGE表明EGⅠ分子量在100～180 kDa,远高于预测值47.3kDa,经肽N-糖苷酶F处理后,降至63～ 75 kDa.[结论]实现了EGⅠ的分泌表达,获得活性为0.558±0.012 U/mg的糖基化重组EGⅠ.

关键词：东方肉座菌、纤维素内切酶、毕赤酵母、PHO1信号肽、糖基化

所属期刊栏目：29

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：福建省中青年教师教育科研项目JA15767

在线出版日期：2019-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1-6,38