鞘糖脂内切糖苷酶的半理性设计

摘要：

”目的”对鞘糖脂内切糖苷酶EGCaseⅡ进行半理性设计,获得高水解活性突变体.”方法”用半理性设计方法进行突变库设计,利用HPLC对突变库进行筛选,随后对阳性突变体进行动力学及底物谱表征,并利用结构建模对活性提高的分子机制进行解析.”结果”获得了对鞘糖脂GM1、GM3水解活性提高的突变体S63 G/D311E、I276L/D311V,活性分别提高为野生型的25.3倍、11.8倍.酶动力学表征显示,S63G/D311E的KM由0.17 mmol/L降低到0.06 mmol/L,kcat由5.5 min-1增大到50.3 min-1.酶-底物复合物模式结构分析表明,D311E、D311V、I276L这几种突变更有利于酶与底物结合,从而提高酶活性.”结论”通过半理性设计成功获得对GM1和GM3水解活性分别提高25.3倍和11.8倍的EGCaseⅡ突变体.

关键词：鞘糖脂内切糖苷酶Ⅱ、半理性设计、分子改造、催化机制

所属期刊栏目：28

分类号：Q556.2(酶)

资助基金：国家自然基金项目“鞘糖脂糖苷合成酶的全局构效关系解析及其分子改造”,31670791;政府间国际科技创新合作重点专项“酰基修饰药物关键酶系的分子设计与药物创新优产”,2017YFE0103300

在线出版日期：2018-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：255-261