小鼠Prune蛋白DHH结构域的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要：

[目的]表达、纯化小鼠Prune蛋白DHH结构域(m-PruneD),并制备多克隆抗体.[方法]生物信息学方法分析m-PruneD氨基酸序列;PCR扩增目的基因m-PruneD,克隆入原核表达载体pET28a(+);IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达,亲和层析法纯化蛋白;用纯化的重组m-PrumeD免疫小鼠制备多克隆抗体;Western Blot检测多克隆抗体特异性.[结果]PCR成功扩增m-PruneD基因,双酶切及测序结果表明成功构建m-PruneD原核表达载体,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表明成功表达约25 kDa的重组蛋白.纯化蛋白免疫小鼠后抗体滴度最高可达1:25 600,所制备的多克隆抗体可特异性识别原核和真核细胞中DHH结构域蛋白.[结论]在E.coli中成功表达小鼠Prune蛋白DHH结构域,制备了多克隆抗体血清,可用于Prune蛋白生物学功能的进一步研究.

关键词：DHH结构域、Prune蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：28

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;陕西省重点研发计划;第四军医大学本科生导师项目

在线出版日期：2018-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：223-229,261