苍白杆菌核糖-5-磷酸异构酶B基因的克隆及表达

摘要：

[目的]将新筛选出的苍白杆菌菌株中的核糖-5-磷酸异构酶B(RpiB)克隆到大肠杆菌中进行异源表达优化.[方法]以苍白杆菌菌株基因组为模板PCR扩增RpiB基因,经酶切连接表达载体pET-28a后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达及优化,利用SDS-PAGE分析表达情况.通过LC-MS-MS验证重组酶活性.[结果]SDS-PAGE分析表明,核糖-5-磷酸酶在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白,分子量在19 kDa左右.优化结果表明在16℃下需要IPTG诱导20 h后蛋白表达量最多.重组粗酶液在30℃下转化L-鼠李糖为L-鼠李酮糖,转化率为19％.[结论]成功克隆并表达出来源于苍白杆菌的RpiB酶,它对其非天然底物糖L-鼠李糖表现出了异构酶活性.

关键词：生物催化、苍白杆菌、核糖-5-磷酸异构酶B、克隆表达、L-鼠李糖

所属期刊栏目：28

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;江苏省"青蓝工程"项目

在线出版日期：2018-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：212-216,285