果胶酶基因剂量效应与水解果胶的工艺研究

摘要：

”目的”实现烟曲霉果胶酶AFPG基因在毕赤酵母表达并获得高产菌株;阐述果胶酶AFPG的基因剂量效应;探究果胶的水解工艺.”方法”采用PCR技术从烟曲霉扩增AFPG基因并克隆到pAO815载体;用同尾酶构建多拷贝串联表达盒,经线性化的质粒电转到毕赤酵母构建重组工程菌;采用实时荧光定量PCR检测AFPG基因拷贝数;用薄层层析(TLC)技术对果胶的酶解产物进行分析.”结果” SDS PAGE分析表明AFPG基因表达了一个约40 kDa的蛋白;拷贝数为2、3、5的重组子摇瓶发酵,蛋白含量分别为0.24 mg/mL 、0.28 mg/mL 、0.35 mg/mL;14 L高密度发酵比活为8783 U/mg;该酶最适温度和pH为70℃和5.0;在底物浓度0.7％ (W/V) ,酶量20 U,水解果胶30 min,转化率达到12％.”结论”果胶酶AFPG的表达存在基因剂量效应,5拷贝是2拷贝表达量的1.5倍,可通过构建多拷贝获得高产菌株.果胶酶解效果明显,水解工艺研究为果胶酶的应用奠定基础.

关键词：果胶酶、基因拷贝数、荧光定量PCR、分泌表达、水解工艺

所属期刊栏目：28

分类号：Q815(生物工程学(生物技术))

资助基金：武汉市科技局科技计划项目”新型饲用耐高温脂肪酶的分子改造与品种创制”,2016020101010084

在线出版日期：2018-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：170-177