人自分泌运动因子哺乳细胞表达纯化及酶学特性

摘要：

[目的]利用哺乳细胞表达系统表达人ATX蛋白,并对其进行纯化、酶学性质分析.[方法]以pFastBacTMHTA-ATX质粒为模板,PCR扩增ATX基因,并连接至质粒pInsulator-8 His,构建真核表达质粒pInsulator-ATX-8His,经双酶切鉴定后,并瞬时转染至HEK293F细胞,SDS-PAGE检测ATX的表达.通过Ni柱和凝胶层析两步法纯化ATX,HPLC鉴定ATX蛋白的纯度.利用Bis-pNPP底物检测纯化ATX的活性及酶学性质.[结果]真核表达质粒pInsulator-ATX-8 His构建成功,并在HEK293F细胞中成功表达,经纯化后ATX蛋白纯度达到98％,并且纯化的ATX具有磷酸二酯酶的活性.酶学性质分析,该酶反应最适pH值为9.0,在0～50℃有较好的热稳定性,金属螯合剂EDTA可抑制ATX活性,金属离子Ca2+、Mg2+、Zn2+促进ATX的活性.[结论]实现了人ATX在哺乳细胞中的表达,获得了高纯度的ATT蛋白,完成了ATX酶学性质的分析.

关键词：自分泌运动因子、哺乳细胞、表达、纯化、酶学特性

所属期刊栏目：27

分类号：Q786;Q814(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家国际科技合作专项基金;国家国际科技合作专项基金

在线出版日期：2017-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：484-490