肠激酶轻链在毕赤酵母中的组成型表达

摘要：

”目的”构建牛肠激酶轻链(EKL)毕赤酵母组成型高效分泌表达系统.”方法”人工合成MF-α信号肽与EKL融合基因,克隆于pGAPzα-A和野生毕赤酵母X-33.镍柱纯化EKL,内切糖苷酶H(Endo H)消化法鉴定糖基化,软件分析糖基化位点,以含EKL位点的融合蛋白作底物验证酶学活性.”结果”获得了8株EKL的高抗性毕赤酵母转化子,其中7株可组成型分泌表达目的蛋白,在摇瓶中表达水平约为20 mg/L.分析表明,EKL表达产物为分子量约43 kDa的N型糖基化蛋白,可有效切割含识别位点的融合蛋白.”结论”成功构建了EKL毕赤酵母组成型高效分泌表达系统.

关键词：肠激酶、毕赤酵母、组成型表达、糖基化

所属期刊栏目：27

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省科技计划项目“基于EGFR二聚体界面靶向策略单克隆抗体抗瘤活性与作用机制研究”,2014A020210027;广东省自然科学基金项目“靶向二聚化界面的新型抗EGFR单抗抑瘤活性和机制研究”,A2015230;广东高校省级重大科研项目“基于EGFR二聚体界面靶向策略治疗性纳米抗体研制”,2016KZDXM042

在线出版日期：2017-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：446-451