尼罗罗非鱼Ly75基因的克隆、原核表达和多克隆抗体制备

摘要：

[目的]获得尼罗罗非鱼淋巴细胞抗原75(OnLy75)基因的cDNA序列和多克隆抗体.[方法]采用RACE技术克隆OnLy75基因的cDNA全序列,通过DNAMAN、MEGA等软件分析其序列特征;构建OnLy75的原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核诱导表达;将纯化后的OnLy75重组蛋白免疫新西兰大耳白兔,并通过Western Blot技术检测多克隆抗体的效果.[结果] OnLy75的cDNA序列全长为6 632 bp,开放阅读框5 199 bp,编码1 732个氨基酸.其OnLy75重组蛋白主要存在于包涵体中;将重组蛋白纯化后免疫新西兰大耳白兔,成功获得了兔抗OnLy75多克隆抗体.用该多抗对尼罗罗非鱼不同器官进行Western Blot内源性检测,结果显示该蛋白在精巢中有丰富的表达.[结论]兔抗OnLy75多克隆抗体的成功制备,为进一步深入研究OnLy75在尼罗罗非鱼组织中的定位及功能研究提供了工具.

关键词：尼罗罗非鱼、淋巴细胞抗原75、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：27

分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项;国家自然科学基金;广东省自然科学基金

在线出版日期：2017-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：223-231