小鼠pre-miRNA-122启动子荧光素酶报告质粒的构建及表达调控

摘要：

”目的”构建小鼠pre-miRNA-122基因启动子荧光素酶报告质粒,研究血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)对miRNA-122表达的影响.”方法”利用生物信息学分析pre-miRNA-122启动子片段并扩增,插入pGL3-basic载体中获得报告质粒pmir-122-luc.将pmir-122-luc转染小鼠Huh-7和HepG2细胞,24h后检测荧光素酶活性;同样将其转染小鼠肝星状细胞(Hepatic Stellate Cells,HSCs),PDGF处理12h后检测活性.”结果”pre-miRNA-122上游5.5 ～4.5 kb为启动子区域.构建的质粒经酶切、测序鉴定正确.pmir-122-luc荧光素酶活性较pGL3-basic显著增加,且在Huh-7细胞高表达(24±5.02倍)而在HepG2细胞低表达(1.8-±0.34倍).pmir-122-luc能在HSCs中表达,且PDGF处理后活性降低(P＜0.05).”结论”小鼠pre-miRNA-122启动子荧光素酶活性报告质粒构建成功;PDGF抑制miRNA-122在HSCs中表达,为探索miRNA-122的表达调控机制提供了新的窗口.

关键词：miRNA-122、报告质粒、血小板衍生生长因子、生物信息学

所属期刊栏目：27

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目“瘦素在肝星状细胞中调控miRNA-122的机制及后者与抑制肝星状细胞激活关键因子SREBP-1c关系”,81400634

在线出版日期：2017-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：211-217