小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达

摘要：

”目的”构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞.”方法”从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达.”结果”PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达.”结论”成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达.

关键词：resistin、慢病毒载体、靶细胞、表达、小鼠

所属期刊栏目：26

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金面上项目“cAMP信号通路介导的FGF21对T2DM糖脂代谢的调控机制研究”,No.81570749;云南省应用基础研究面上项目“FGF21和INS对1型糖尿病的联合基因治疗研究”,No.2013FB089;协和青年基金和中央高校基本科研业务费专项“恒河猴resistin剪接体的发现及其对胰岛素敏感性的调节作用与分子机制”,No.33320140083

在线出版日期：2016-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：119-125,135