决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建

摘要：

”目的”克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体.”方法”从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序列,并将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/COTI.”结果”决明胰蛋白酶抑制剂基因核苷酸长度为630 bp,编码一条长度为209个氨基酸的多肽.决明胰蛋白酶抑制剂与不同植物来源的Kunitz蛋白酶抑制剂有高度的同源性,表明其属于Kunitz蛋白酶抑制剂家族成员.所获重组质粒pET-28a(+)/COTI经过双酶切鉴定,其含有目的片段,且重组质粒构建正确.”结论”克隆了决明胰蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列,并成功构建了含有该基因的原核表达载体,这为该基因的进一步表达及功能鉴定奠定了基础.

关键词：决明、胰蛋白酶抑制剂基因、克隆、原核表达载体

所属期刊栏目：25

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目”NAC特异基因调控铁皮石斛原球茎原分生组织形成的分子机理研究”,No.31371232;国家重大专项”重大新药创制””葛黄有效组分防治2型糖尿病候选药物研究”,No.2014ZX09304-307-001-019;国家级大学生创新创业训练计划项目”决明Kunitz蛋白酶抑制剂活性位点的鉴定研究”,No.2015091;西南交通大学个性化实验项目”决明Kunitz 抑制剂基因的原核表达载体构建”,No.GX201410235资助

在线出版日期：2015-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：409-413