活化型及失活型SUMO1真核表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的:构建活化型及失活型SUMO1(small ubiquitin-related modifier1)真核表达载体并鉴定其蛋白活性.方法:以野生型HA-SUMO1-pcDNA3.1为模板,采用PCR扩增目的基因,将其连接入克隆载体T vector,筛选阳性重组子;将目的基因酶切回收后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1.将阳性克隆转染HEK293细胞,免疫印迹鉴定底物蛋白与SUMO1的结合情况(即SUMO化水平).结果:活化型及失活型SUMO1目的基因被扩增,并且亚克隆入pcDNA3.1,且测序结果与预期一致.免疫印迹分析显示,转染活化型SUMO1组检测到显著的蛋白SUMO化条带,而失活型组则无明显条带.结论:活化型及失活型SUMO1真核表达载体成功构建,并可于HEK293细胞高效表达.

关键词：SUMO1、活化型、失活型、SUMO化、真核表达载体、表达

所属期刊栏目：24

分类号：Q784;R743.3(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目“脑缺血PSD-95酪氨酸磷酸化对突触后Src信号网络的调控”,No.81173030;“LK3的SUMO化修饰在缺血性脑损伤中的作用”,No.81100852;江苏省高校自然科学研究重大项目“脑缺血蛋白质类泛素SUMO化修饰的研究”,No.11KJA310005;江苏省高校优势学科建设工程资助项目PAPD;江苏省青蓝工程;“徐州医学院振兴计划”资助

在线出版日期：2014-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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