肌酸激酶同工酶MB的原核表达、纯化及冻干品制备

摘要：

目的:制备稳定性好、特异性强、灵敏度高的肌酸激酶同工酶质控品.方法:将密码子优化后的肌酸激酶M亚基和B亚基序列合成后构建表达载体PET28-M、PET28a-B;将其分别转入BL21(DE3)后,用0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导表达得到肌酸激酶同工酶MM和BB;MM和BB分别经Ni2+纯化后按一定比例混合处理、完成后期折叠得到MB;研究蛋白MB最佳冻干工艺,并跟踪冻干品稳定性.结果:目的蛋白M亚基和B亚基分子量大小均为45 kD左右,1:1混合25℃静置16 h后具有较高的灵敏度和较强的特异性.蛋白冻干后形态良好,37℃可以稳定保存11d;25℃、4℃可以稳定保存4个月以上.结论:该蛋白的冻干制品成本低、稳定性好、特异性强、灵敏度高,可用于定性定量肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒的质控品.

关键词：CK-MB、原核表达、纯化、冻干品、急性心肌梗死

所属期刊栏目：24

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划项目“新型临床即时检测分析POCT仪器及试剂一体化检测系统的研制”,No.2011AA02A103;广东省战略新兴产业核心技术攻关项目“免疫荧光定量快速检测技术在重大疾病检测中的应用”,No.2012A080800007资助

在线出版日期：2014-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：86-91