Bacillius naganoensis普鲁兰酶基因的分子改造及酶学性质研究

摘要：

目的:通过缺失原酶上氨基酸残基,提高普鲁兰酶的酶活,并对其突变体重组酶进行酶学特性研究.方法:以Bacillius naganoensis基因组DNA为模板,PCR扩增大小为2 781 bp的普鲁兰酶编码基因,并通过PCR方法缺失原酶上的前78个氨基酸残基,获得突变体PulA234,将编码基因酶切连接到表达载体pET-22b(+),转化Escherichia coli BL21 (DE3).IPTG诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE和酶学特性研究.结果:突变体发酵液的酶活是原酶的19倍,SDS-PAGE电泳结果显示有明显特异性条带,分子质量约为100 kDa.该突变酶的最适反应温度为60℃,最适pH为4.75,在pH3.8～6.6范围内活性稳定,Cu2+、Ca2+对酶活有激活作用.结论:经改造的重组酶酶活力有所提高,具有良好的pH和酸稳定性,为普鲁兰酶酶制剂工业化生产及应用奠定基础.

关键词：普鲁兰酶、长野芽孢杆菌、酶分子改造、酶学性质

所属期刊栏目：24

分类号：Q784;Q786;TQ925+.1(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2014-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：53-57