pGEX-4T-3-MFGF21表达载体的构建、表达与纯化

摘要：

目的:构建小鼠FGF21(fibroblast growth factor 21,FGF21)重组表达载体pGEX-4T-3-MFGF21,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化后获得小鼠FGF21融合蛋白.方法:提取小鼠肝脏总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,将其克隆至pMD19-T进行保存.以T载体为模板,扩增MFGF21 mat-peptide,构建重组原核表达载体pGEX-4T-3-MFGF21.将重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21 (DE3)中,在不同IPTG浓度、温度及转速下对表达载体进行诱导表达,优化表达条件,表达产物经SDS-PAGE电泳以鉴定是否为可溶性表达,采用亲和层析法纯化各表达产物后,进行Western blotting鉴定.结果:成功构建重组表达载体pGEX-4T-3-MFGF21,对其进行可溶性表达后成功纯化出GST-MFGF21,经Western-blotting鉴定为目的蛋白.结论:成功构建pGEX-4T-3-MFGF21,得到纯化的GST-MFGF21蛋白.

关键词：小鼠成纤维细胞生长因子(FGF21)、pGEX-4T-3、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：24

分类号：R34;Q782;Q786(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2014-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：18-24