人PD1胞外须基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

摘要：

目的:研究人PD1的生物学活性,制备人PD1胞外段区域及其特异性抗体.方法:用PCR方法扩增编码人PD1胞外段的基因序列(hPD1 ecr),将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白用SDS -PAGE和Western blot鉴定.纯化目的蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),流式细胞术检测抗体滴度及其特异性.结果:原核表达载体pET28 a(+)-PD1 ecr成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PD1胞外区蛋经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确.用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论:得到纯化的人PD1胞外蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下人PD1蛋白,为进一步研究PD1功能奠

关键词：人PD1胞外段基因、原核表达、免疫原性、多克隆抗体

所属期刊栏目：20

分类号：R392

资助基金：湖北省自然科学基金项目2008年ZRY1279

在线出版日期：2010-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：23-25