酿酒酵母脂肪酶基因TGL3的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

摘要：

目的:克隆Saccharomyces cerevisiae脂肪酶基因,并实现其在Pichia pastoris中高效表达.方法:根据NCBI GenBank中已公布的Saccharomsyes cerevisiae脂肪酶基因TGL3设计引物,以Saccharomyces cerevisiae总DNA为模板,PCR扩增目的片段,构建重组子pPIC9K-TGL3,转化到Pichia pastoris GS115.结果:扩增得到1 929bp的基因片段,与GenBank中公布的序列氨基酸同源性达99.7%,编码的643个氨基酸巾有脂肪酶的保守序列GXSXG,位于235～239位.重组子摇瓶发酵120h发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,酶学性质研究表明:该酶的最适作用温度为40℃,在25℃～40℃之间能保持60%以上酶活力.最适pH值为8.5,在pH6.5-9.0之问能保持50%以上的酶活力.除Al3+和Fe2+外,该酶不受Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Ni+、Sr2+等多种金属离子的影响.结论:发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,是原菌株的l0倍,成功实现了该基因的高效表达.

关键词：酿酒酵母、脂肪酶、基因克隆、毕赤酵母、表达

所属期刊栏目：20

分类号：Q785;Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：20-22