通粳1号水稻乙醛脱氢酶基因的克隆及原核表达

摘要：

目的:克隆通粳1号水稻乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)基因,并在大肠杆菌中进行体外表达.方法:提取通粳1号水稻幼根总RNA,RT-PCR法扩增ALDH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pET5a表达质粒中,转化BL21 (DE3)宿主菌,平板培养筛选,挑取阳性菌落并提取质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列.含重组质粒的BL21(DE3)进行常规LB扩大培养,用不同浓度的IPTG作用不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.结果:质粒中插入的ALDH 片段为1 668bp,含有完整的开放阅读框架,序列与GenBank比较无差异,插入方向正确无误,表达蛋白分子量为61.8kDa左右,符合预期值,IPTG最佳诱导时间为3h,0.1 mmol/L～O.8 mmoL/L浓度的IPTG作用效果无显著差异.结论:该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ALDH的作用和应用生物工程法大量获得ALDH奠定基础.

关键词：水稻、ALDH、克隆、原核表达

所属期刊栏目：20

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：16-18