10.3969/j.issn.1004-311X.2006.06.002
重组人ZP3蛋白在大肠杆菌中的高效表达
目的:用基因工程方法制备重组人ZP3蛋白.方法:以全长人ZP3 cDNA片段为模板,通过PCR扩增出编码人ZP3蛋白不同肽段的cDNA片段,然后将这些cDNA片段分别插入到表达载体pET-19b的NcoⅠ-BamHⅠ或NdeⅠ-BamHⅠ位点内,共构建成6种人ZP3蛋白非融合表达质粒(pEZP3-1～pEZP3-6)和3种人ZP3蛋白融合表达质粒(pEZP3-7～pEZP3-9).将这9种表达质粒分别转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)感受态细胞并选择出Apr转化子,将Apr转化子接种到NZCYM培养基中(含AP 100μg/mL),在35～37℃振荡培养到对数生长期,加入IPTG至1.0～1.5mmol/L浓度诱导培养3h,离心收集细胞进行SDS-PAGE电泳检测和Western Blot杂交分析.结果:这9种人ZP3蛋白表达质粒在大肠杆菌Rosetta2(DE3)中得到高效表达,目的蛋白占总细胞蛋白的10～25%,表达产物均以包涵体形式存在.结论:成功构建了重组人ZP3蛋白原核表达系统,为进一步研究和应用人ZP3蛋白打下了基础.
人ZP3蛋白、表达、大肠杆菌
16
Q5(生物化学)
广东省科技攻关计划2004B10401004
2007-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
3-7
