家蝇抗菌肽Defensin基因在COS-7细胞中的瞬时表达

摘要：

目的:研究家蝇抗菌肽Defensin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达情况,并对表达产物的抗菌作用进行初步检测.方法:以Defensin基因为模板设计特异性引物,扩增在C端含6×His标签的Defensin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His_6.以阳离子脂质体LipofectamineTM2000为载体,对宿主细胞COS-7进行重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His_6和空载体pcDNA3.1(+)的转染,72h后收集细胞培养上清液,表达产物经His-Trap HP亲合层析柱分离纯化和Western blotting鉴定后,进行杀菌活性的初步检测.结果:重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His_6组细胞培养上清液的纯化物,行Western blotting得到了分子量大小约为10.0kD的单一目的条带,与预期相符;杀菌活性试验中发现:该纯化物对大肠杆菌E.coli K12 D31具有一定的杀菌活性.结论:家蝇抗菌肽Defensin基因在宿主细胞COS-7中得到了正确表达.

关键词：天蚕素、真核表达、转染、杀菌活性

所属期刊栏目：16

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省广州市科技攻关项目2005Z3-E0211

在线出版日期：2006-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：10-11