四氢嘧啶羟化酶的克隆表达、酶学性质及其在羟基四氢嘧啶合成中的研究

摘要：

四氢嘧啶羟化酶(EctD)是双加氧酶超家族的重要成员,其底物四氢嘧啶和产物羟基四氢嘧啶的应用广泛,因此EctD在生物制造领域具有重要的应用价值.从来源于新疆盐湖的需盐色盐杆菌(Chromohalobacter salexigens)中获得四氢嘧啶羟化酶基因(ectD),并在E.coli BL21(DE3)中进行表达,对异源表达的EctD酶学性质进行研究.结果表明:EctD的最适温度是30℃、最适pH是7.5,在30℃、pH 6.5～8.0条件下具有较好的稳定性;Fe2+、Ba2+、Mn2+、Mg2+、Fe3+和Ca2+离子可增强EctD的酶活,而Co2+、Zn2+和Cu2+离子明显抑制EctD的酶活;动力学参数为Km=7.63 mmol/L、kcat/Km=1.01 1 L/(mmol·s)、Vmax=6.75 μmol/(mL·min).在最适条件下,该酶以 70 mmol/L 四氢嘧啶为底物,催化反应25 h后,可生成68 mmol/L的羟基四氢嘧啶,底物转化率可达98％.本研究通过对EctD的表达和表征,为酶法合成羟基四氢嘧啶奠定基础.

关键词：四氢嘧啶羟化酶、需盐色盐杆菌、重组表达、酶学性质、羟基四氢嘧啶

所属期刊栏目：21

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：江苏先进生物制造协同创新中心自主课题;材料化学工程国家重点实验室开放课题

在线出版日期：2023-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：263-270