优化反应体系提升Phanta DNA聚合酶对非处理标本的检测性能

摘要：

在食品检测、法医鉴定、分子诊断等领域经常需要对未提纯DNA的非规范处理标本进行聚合酶链式反应(PCR)扩增.然而,由于非处理标本中存在多种抑制成分,常见的DNA聚合酶并不能满足非处理标本的检测需求.本研究通过调节添加剂、Mg2+浓度以及酶量,对Phanta DNA聚合酶进行反应条件优化,提升Phanta DNA聚合酶突变体的扩增性能,并考察该聚合酶在优化条件下对血液、植物和食品等非处理标本的检测性能.结果表明:在反应缓冲溶液SF Buffer中加入质量分数5%二甲基亚砜(DMSO)和3 mmol/L Mg2+,以及50 μL反应体系中使用1 U酶时,Phanta DNA聚合酶突变体具有最强的扩增性能,可对低至0.05 ng基因组、植物叶片粗提液、高达40%全血浓度及食品粗提液进行有效检测,性能优于普通Taq DNA聚合酶及未进行反应条件优化的Phanta DNA聚合酶.本研究在食品检测、法医鉴定、分子诊断等应用中非处理标本的检测具有极大应用价值.

关键词：PhantaDNA聚合酶、PCR、添加剂、粗品、快速检测

所属期刊栏目：16

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：江苏省重点领域共性技术攻关项目苏经信科技2016636号

在线出版日期：2018-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：102-108