LUBAC介导RabGEF1的线性泛素化修饰

摘要：

目的 验证RabGEF1(Rab guanine nucleotide exchange factor 1)为线性泛素化修饰的新底物.方法 在pEF6/Myc-HisC载体中克隆人RabGEF1基因.通过免疫共沉淀(Co-IP)实验验证RabGEF1和HOIP的相互作用.利用GST-pulldown实验探索RabGEF1与HOIP相互作用结构域.通过免疫荧光实验验证RabGEF1和HOIP的相互作用与亚细胞定位.应用体内泛素化实验检测RabGEF1的线性泛素化修饰.通过NTA-His泛素化实验进一步明确RabGEF1能够发生线性泛素化修饰.将RabGEF1的泛素化蛋白质样品进行质谱分析,根据质谱结果提示的RabGEF1泛素化位点构建赖氨酸位点突变质粒,进一步在体内泛素化实验中验证RabGEF1的线性泛素化修饰位点.结果 RabGEF1与HOIP存在相互作用,且HOIP通过ZF-NEF结构域与RabGEF1发生直接相互作用.RabGEF1与HOIP共同定位于细胞质.LUBAC介导RabGEF1发生线性泛素化修饰依赖于LUBAC酶活性,RabGEF1泛素化修饰位点为K158.结论 RabGEF1为线性泛素化修饰的新底物,且K158是其发生线性泛素化修饰的位点.

关键词：RabGEF1、线性泛素化修饰、LUBAC、免疫共沉淀

所属期刊栏目：50

分类号：Q7;R392

资助基金：国家自然科学基金;奉贤区科委社会类科技发展基金资助项目

在线出版日期：2023-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：749-759