新型miRNA表达框架下调端粒酶活性并抑制视网膜母细胞瘤细胞生长

摘要：

目的 本研究致力于设计一种新的miRNA表达框架(MEC),其以hTERT和hTR的特异性序列为靶点.该框架能够有效改善传统RNAi方法中miRNA易降解和细胞毒性问题,为miRNA的合成提供一种简便的方法.方法 采用重叠PCR方法构建hTERT和hTR特异的miRNA表达框架.采用TRAP银染色和TRAP实时荧光定量PCR检测端粒酶活性.实时荧光定量PCR法测定端粒长度,MTT法测定细胞活力.annexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 成功构建了靶向hTERT/hTR特异性miRNA表达框架.不同MEC对端粒酶活性的抑制程度不同.端粒酶的沉默可引起视网膜母细胞瘤(RB)细胞G0/G1期生长阻滞,导致细胞凋亡.结论 miRNA介导的端粒酶沉默是一种有效抑制RB细胞生长的策略,开发一个强大的系统来充分探索miRNA的作用是必要的.本文构建的MEC显示了强大的RNAi效应,可成为筛选用于RB基因治疗的RNAi靶向序列的有效工具.

关键词：端粒酶、miRNA、RNAi、视网膜母细胞瘤、基因治疗

所属期刊栏目：49

分类号：R73-3(肿瘤学)

在线出版日期：2023-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：2428-2439