穿心莲内酯恢复突变型p53野生型功能的作用及机制研究

摘要：

目的 p53是人体内重要的肿瘤抑制因子,但在人类肿瘤中因高频突变而失去抑癌功能.突变型p53(mutant p53,mutp53)可促进肿瘤的发生、发展和转移.由于在肿瘤细胞中通常有较高表达,mutp53已成为区别于正常细胞的一个特异性抗肿瘤靶点.本研究旨在探索穿心莲内酯的抗肿瘤作用机制,为寻找靶向mutp53的抗肿瘤化合物提供理论依据.方法 构建可以快速筛选具有恢复mutp53下游转录因子的荧光素酶系统,观察穿心莲内酯对H1299-p53 R273H-PUMA-luciferase和Hl299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中PUMA基因的表达情况;采用免疫荧光实验,检测穿心莲内酯对HT29(R273H)和SK-BR-3(R175H)细胞中mutp53的表达影响;采用免疫印迹实验进一步观察穿心莲内酯恢复了 mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达;随后采用MTT和流式细胞分析,检测穿心莲内酯对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响;此外,还通过siRNA敲低Hsp70表达后,研究穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用.结果 穿心莲内酯可以增加H1299-p53 R273H-PUMA-luciferase和Hl299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中 PUMA 基因的表达;穿心莲内酯可以降低HT29(R273H)和SK-BR-3(R175H)细胞中mutp53的比例,同时增加野生型p53的比例;穿心莲内酯恢复了mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡;穿心莲内酯可以增加分子伴侣Hsp70的表达,通过siRNA敲低Hsp70后,穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用明显受到抑制.结论 穿心莲内酯可能通过影响Hsp70的表达从而激活突变p53下游靶基因而发挥抗肿瘤作用.

关键词：突变型p53、穿心莲内酯、重激活、细胞凋亡、分子伴侣

所属期刊栏目：49

分类号：Q28;Q291(细胞生物学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;云南省重点项目

在线出版日期：2022-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1763-1773