DNA末端构型调控RecJ核酸外切酶活性

摘要：

目的 核酸酶介导的DNA双链末端切割对同源重组修复至关重要.然而,DNA末端构型对RecJ5'-3'核酸外切酶活性的调控尚不清楚.本研究旨在探究DNA3'端和5'端构型对RecJ核酸外切酶活性的影响及其机制.方法 为探究DNA3'端构型对RecJ核酸外切酶活性的影响,使用含有Mg2+的体系,对具有不同3'突出末端长度(9 nt与18 nt)和3'突出末端修饰(磷酸化和硫代磷酸酯修饰)的单链DNA分别进行RecJ核酸酶活性检测.为揭示DNA 3'端构型对RecJ外切酶活性的调控机制,在Mg2+缺失的体系中,使RecJ与底物结合后进行凝胶迁移实验(EMSA).为探索其他调控因子与DNA3'端构型对RecJ的协同作用,分别检测5'端磷酸化修饰和单链DNA结合蛋白(SSB)对DNA3'突出末端修饰的影响.结果 DNA3'端构型包括突出末端的长度和修饰(磷酸化和硫代磷酸酯修饰)均会抑制RecJ外切酶活性.DNA 3'端磷酸化和硫代磷酸酯修饰通过重塑RecJ-DNA的结合模式抑制RecJ外切酶活性.DNA 5端磷酸化修饰可增强RecJ对具有不同3'端修饰底物的核酸外切酶活性,并改变RecJ-DNA的结合模式.此外,SSB通过增强RecJ-DNA结合可部分克服DNA 3'端修饰介导的抑制作用.结论 DNA3'与5'端构型协同调控RecJ核酸外切酶的活性.

关键词：同源重组、RecJ核酸外切酶、DNA末端构型、DNA末端切割调控

所属期刊栏目：49

分类号：Q55;Q52(酶)

在线出版日期：2022-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1085-1093