多态性蛋白Mad2与其配体Cdc20121-138的相互作用研究
多态性蛋白Mad2是有丝分裂纺锤体检测点(SAC)的关键蛋白,也是多态性蛋白质家族中研究最广泛的成员之一.Mad2有两种不同的天然构象:O-Mad2和C-Mad2.Mad2构象间的转变及其与配体Cdc20间的相互作用对SAC发挥其生物学功能至关重要.本文利用荧光各向异性技术对O-Mad2和C-Mad2与配体TAMRA-Cdc20121-138间相互作用的热力学及动力学过程进行了系统表征.结果表明:在无盐和低盐溶液(100 mmol/L NaCl)中,Mad2两种构象与Cdc20121-138的平衡解离常数(KD)均在10-6 mol/L,但C-Mad2与Cdc20121-138结合的KD值约为O-Mad2的1/5;在高盐(300 mmol/L NaCl)溶液中,Mad2两种构象与TAMRA-Cdc20121-138结合的KD值无明显差别.动力学实验结果显示,在同一种缓冲液中Mad2两种构象与Cdc20121-138相互作用的解离速率常数kd没有显著差别,而C-Mad2与Cdc20121-138的结合速率常数ka却比O-Mad2高一个数量级,这表明C-Mad2与Cdc20121-138不仅结合力更强,且结合速率要快很多.Mad2与Cdc20121-138突变体间的相互作用以及离子强度对二者相互作用的影响结果提示,Mad2和Cdc20间的相互作用不是通过静电相互作用,而可能是通过疏水相互作用来实现的.本研究为揭示多态性蛋白Mad2的构象转变机理及其在有丝分裂过程中的作用机制提供了重要的实验基础.
多态性蛋白Mad2、Cdc20、热力学、动力学、相互作用
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O6 ;TQ4
国家自然科学基金21573289,21373271,21673294资助项目.This work was supported by a grant from The National Natural Science Foundation of China21573289,21373271,21673294
2017-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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