荧光光谱法定量测定纤维素酶活性架构中单个氨基酸突变对底物结合力的影响

摘要：

纤维素酶活性架构是酶分子中多个氨基酸残基构成的可结合并催化底物的功能区,其中色氨酸等芳香族残基在该区域中起着重要作用.本研究利用荧光光谱法,定量分析了纤维素酶ChCel5A活性架构中色氨酸与底物的结合动力学过程,通过色氨酸荧光猝灭的定量分析,确定了色氨酸特异性结合时的底物浓度范围,并且测定了ChCel5A活性架构中单个氨基酸突变导致的底物结合常数的变化,与催化动力学参数比较发现,荧光光谱法可准确表征纤维素酶与底物的结合力及其单个残基突变引起动力学参数的变化.此外,由于pNP中含有强的吸电子基团,因而以pNPC等为配体时会高估与色氨酸的结合常数约20～100倍.荧光光谱法可以测定纤维素酶结合糖分子底物的动力学参数,该方法具有灵敏和快速的特点,这为蛋白质与底物之间相互作用的定量分析提供了新的视角.

关键词：荧光光谱法、纤维素酶、色氨酸、活性架构、结合力、定量分析

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资助基金：国家自然科学基金31570051,31370111和山东省重点研发计划2015GSR121019资助项目.This work was supported by grants from The National Natural Science Foundation of China 31570051,31370111 and The Key Technologies R&D Program of Shandong Province 2015GSF121019.

在线出版日期：2016-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1086-1093