DNA双链区的切割导致碱变性超螺旋质粒pBR322的分子内结节

摘要：

为进一步研究碱变性超螺旋DNA(Ⅳ型DNA;DNA Ⅳ)的结构,对碱变性质粒pBR322进行了酶学分析并利用原子力显微镜(AFM)对新形成的DNA结构进行了观察和比较.在所有已检测的限制酶中只有Pst Ⅰ可以切割质粒pBR322的Ⅳ型DNA分子,说明在这种变性的DNA分子中仍存在少数完整的限制酶识别位点.与碱变性DNA分子的闭合环状结构相反,AFM成像的结果显示Pst Ⅰ处理后的DNAⅣ分子均为开放结构,同时这种分子包含明显的DNA结节.与DNAⅣ分子相比,这种DNA分子的表观长度缩短了大约11％.有意思的是,大肠杆菌拓扑异构酶Ⅳ(一种Ⅱ型拓扑异构酶)也可以在pBR322 DNAⅣ分子中引入分子内结节,而这种结节DNA分子仍然保持闭合状态.AFM的结果表明上述两种结节的DNA分子在表观长度及结节结构的尺寸上均比较相似.这些发现证实,在碱变性的超螺旋DNA分子中仍然保留着一些长度较短的、含有特异性碱基配对的DNA双链区,而在这些区域内的DNA双链断裂可以导致DNA结节.

关键词：DNA Ⅳ、限制性内切酶、DNA拓扑异构酶、DNA结节、原子力显微镜

所属期刊栏目：43

分类号：R73;R378.21;R9

在线出版日期：2016-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：778-786