苜蓿中华根瘤菌fabA和fabB基因功能的鉴定

摘要：

在大肠杆菌(Escherichia coli)脂肪酸合成酶体系中,fabA基因编码有双功能的3-羟基脂酰ACP脱水异构酶,其异构产物能被fabB基因编码的3-酮基脂酰ACP合成酶Ⅰ延伸,合成不饱和脂肪酸,该FabA-FabB途径被认为是缺氧条件下不饱和脂肪酸合成的经典途径.生物信息学分析发现,苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)的SmFabA与EcFabA相似性达到60.6％,具有相同的保守活性位点和两个保守的α螺旋结构;SmFabB与EcFabB相似性达到61.1％,具有相同的Cys-His-His活性中心.用携带SmfabA和SmfabB的质粒载体遗传互补大肠杆菌湿度敏感突变株CY57和CY242,在添加三氯森(TCL)抑制烯脂酰ACP还原酶活性的条件下,转化子能在42℃恢复生长,且放射性薄层层析能检测到转化子中不饱和脂肪酸棕榈油酸(A9C16:1)和十八碳烯酸(△11C18:1)的合成.体外重建脂肪酸合成反应表明,SmFabA能催化羟脂酰ACP的脱水反应且能够使反-2-癸烯酰ACP异构化,SmFabB能催化不同链长的脂酰ACP和丙二酸单酰ACP的聚合反应.另外,未得到SmFabA和SmFabB的突变株,表明SmFabA和SmFabB可能是苜蓿中华根瘤菌脂肪酸合成酶系中必不可少的关键蛋白.上述结果证实了苜蓿中华根瘤菌fabA和fabB两个基因在不饱和脂肪酸合成中的功能.

关键词：苜蓿中华根瘤菌、细菌脂肪酸合成、3-羟基脂酰ACP脱水异构酶、3-酮基脂酰ACP合成酶Ⅰ

所属期刊栏目：40

资助基金：grants from The National Natural Science Foundation of China31200028;The Specialized Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China20104404110005;Foundation for Distinguished Young Talents in Higher Education of Guangdong LYM10038.国家自然科学基金31200028;高等学校博士学科点专项科研基金20104404110005;广东高校优秀青年创新人才培养计划LYM10038

在线出版日期：2014-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1148-1159