A/U富集片段RNA结合蛋白的固相纯化与鉴定

摘要：

RNA与细胞靶蛋白结合是RNA发挥其生物学功能的重要基础,因此,分离和鉴定RNA结合蛋白是研究RNA功能的必要步骤.目前,RNA结合蛋白的分离和鉴定方法较多,但各有优缺点.本实验利用可溶性碳二亚胺(EDC)介导的缩合反应,将A/U富集片段RNA共价偶联到固相介质amine M-270上,再用固定化RNA经亲和层析从细胞抽提物中分离纯化RNA结合蛋白,并以SDS-PAGE联合质谱分析和Western blotting等方法鉴定RNA特异性结合蛋白.最后通过荧光原位杂交和共聚焦显微镜证明这些RNA特异性结合蛋白确与RNA在细胞内结合.实践证明这一方法简单、高效、易于掌握.

关键词：C/EBPβ 3'UTR、A/U富集RNA、hnRNPC、核酸-蛋白质相互作用

所属期刊栏目：40

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金30970585,31170722;分子生物学国家重点实验室开放课题组运行费资助项目

在线出版日期：2013-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：386-391