二硫键形成促进双载体转断裂B区缺失型凝血因子Ⅷ基因

摘要：

双载体共转B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)重链和轻链基因是克服腺相关病毒载体(AAV)容量限制的一种策略,但重链分泌的低效性产生链不均衡性,影响转基因的功效.假设重、轻链链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效,本文将BDD-FⅧ的重链A2区的Met662和轻链A3区的Asp1828突变为Cys.双载体培养的COS-7细胞共转染突变重链和轻链基因,Western blot显示细胞内二硫键交联的重、轻链蛋白形成,ELISA和Coatest分析细胞培养上清的BDD-FⅧ重链分泌量和生物活性,分别为(109±13) μg/L和(0.65±0.12) U/ml,明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞((71±11) μg/L和(0.35±0.05)U/ml).结果表明,链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效,为进一步动物体内运用双AAV载体转BDD-FⅧ基因提供了实验依据.

关键词：B区缺失型凝血因子Ⅷ、双载体、转基因、链间二硫键

所属期刊栏目：39

分类号：Q5;Q78

资助基金：山东省自然科学基金ZR2010CM061;烟台市科技计划项目2008152;教育部留学回国人员科研启动基金项目20071108;鲁东大学科研基金项目LZ20083305

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：181-187