丙型肝炎病毒F蛋白缺失对病毒复制及感染性的影响
探索了F蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响.利用定点突变方法,将J6JFH1的核心基因引进5个终止密码子以中断F蛋白的表达,从而获得F蛋白缺失的病毒复制子J6JFHl/AF.体外制备RNA转录体,并电穿孔转染Huh7.5.1细胞,采用免疫荧光、实时荧光定量PCR方法以及病毒感染等方法,观察F蛋白缺失对病毒复制、蛋白质表达及转染细胞上清感染性病毒颗粒产生的影响.在此基础上,构建5个单一突变病毒体,对HCV核心蛋白进行二级结构分析,观察核心蛋白二级结构对HCV复制和翻译的影响.结果显示,转染48 h后,J6WH1/△F与野生型J6JFH1相比,J6JFH1/△F转染阳性细胞数明显降低,细胞内HCVRNA水平降低约95％,J6JFHl/ΔF转染后不同时间点细胞上清中HCVRNA拷贝数和病毒颗粒也明显降低.5个单一突变体不影响核心基因二级结构,病毒在细胞内复制和感染性与野生型水平一致.J6JFH 1/ΔF所产生的改变可能是由于5处突变导致核心基因二级结构改变而造成的.结果说明,HCVF蛋白缺失不影响病毒的复制翻译及病毒颗粒的包装释放,核心蛋白二级结构的改变对病毒复制和翻译则产生较大影响.
丙型肝炎病毒、F蛋白、核心蛋白、二级结构、病毒复制
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R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金;国家传染病防治科技重大专项;上海市重点学科建设项目
2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
142-150
