基于荧光微球液相基因表达阵列的建立
建立基于荧光微球的液相基凶表达阵列,用于特定基凶组合的表达谱分析.采用带有不同强度荧光鉴别信号的羧基化微球,与氨基修饰的不同标签寡核苷酸序列化学偶联,制成微球阵列.多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)用于扩增靶基因核苷酸序列,即通过RNA标本六随机引物逆转成cDNA,与不同基因特异性的一对探针杂交,耐高温的连接酶联接,最后采用生物素标记的同一对引物扩增.PCR产物与微球阵列液相杂交,加入链亲和素标记的PE染料,上流式细胞仪检测.应用这一系统检测骨髓增生异常综合症中难治性贫血(RA)、难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)、难治性贫血伴转化中原始细胞增多(RAEBt)、急性髓细胞性白血病(AML)和其他组(包括再生障碍性贫血、血小板减少、巨幼贫、溶贫等)差异表达谱,差异表达结果用实时荧光定量PCR验证.共建立了5个基凶的微球阵列,分别为RaplGAP、RAC2、SPA1、RhoBTB3和内参GAPDH,每个基因检测的线性范围为0.002 5～0.1μmol,液相表达阵列具有良好的特异性和重复性(P＜0.001).检测RA、RAEB、RAEBt、AML和其他组差异表达发现,RAC2、RhoBTB3、SPA-1和RaplGAP各组间有显著性差异性存在(分别为P＜0.000 1,P=0.049 1,P=0.020 6和P=0.004 6),其差异显著性与实时荧光定量PCR一致,泊松相关系数分别为0.930,0.946,0.945和0.921,具显著性(P＜0.001).结果表明,成功建立了基于荧光微球的液相基凶表达阵列,其敏感性高、特异性强、重复性好.
基因表达谱、微球、连接、流式细胞、杂交
38
Q78(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金30470733
2011-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
661-669
