含有Rubisco小亚基启动子和转运肽序列的通路克隆入门载体的构建和应用

摘要：

Gateway(通路克隆)技术是最近开发出来的一种分子克隆技术,其特点是操作简单、省时高效,己经成功应用于很多基因表达载体的构建.然而,现有的通路克隆植物表达载体不包含任何将表达蛋白定位到叶绿体中的序列.将通路克隆入门质粒载体pENTR-2B的XmnⅠ位点改造成Hind Ⅲ位点,产生入门载体pENTR*-2B,然后将番茄1,5二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)小亚基3C的启动子(PrbcS)及其转运肽序列(*T)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因亚克隆到pENTR*-2B中,构建通路克隆入门载体pENTR*-PrbcS-*T-GFP.实验结果证实,用pENTR*-PrbcS-*T-GFP和通路克隆的植物表达载体进行LR反应,构建GFP的光诱导型植物表达载体,可以成功地将表达的GFP定位到转基因植物的叶绿体中.利用β-葡糖苷酸酶(GUS)报告基因替代该入门载体中的GFP基因做试验也得到相似的结果.这说明用目的基因替换该入门载体中的GFP可以构建目的基因的入门载体,然后用通路克隆技术可以快速构建其光诱导型植物表达载体,将表达的目的蛋白定位到转基因植物或组织细胞的叶绿体中.

关键词：通路克隆技术、1、5、二磷酸核酮糖羧化酶小亚基3C启动子、入门载体、植物表达载体、叶绿体定位

所属期刊栏目：38

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）;国家自然科学基金;云南省中青年学术与技术带头人培养费

在线出版日期：2011-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：269-279