表达短lef-1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抗性

摘要：

为了探讨RNAi抑制家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的效果,用带有lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo转染家蚕BmN培养细胞,通过G418(750～800mg/L)筛选,获得了稳定转化细胞系.病毒感染试验显示,稳定转化细胞的病毒感染率比正常细胞低53%、转化细胞形成的多角体数量为普通细胞中的2/3、细胞培养上清中的游离病毒减少了90%以上,表明病毒在转化细胞中的增殖受到明显抑制;半定量RT-PCR结果显示,转化细胞中病毒lef-1的转录水平仅为正常细胞的2/5～3/5,表明转化细胞表达的lef-1 dsRNA抑制了病毒lef-1基因的表达.通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点,结果表明,在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组.

关键词：RNA干扰、家蚕核型多角体病毒、培养细胞、piggyBac转座子

所属期刊栏目：36

分类号：Q756(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金30571404;江苏省教育厅自然科学基金05KJD230181;苏州市人才项目基金2005-03;国家重点基础研究发展计划9732005CB121000

在线出版日期：2009-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1356-1363